Глинкина Жанна Ивановна — д. б. н., генеральный директор ООО «Хайтек Генетикс»
119532, г. Москва, Ленинский пр-т, д. 111, кор. 1
11/1 Leninskiy Prospect, Moscow, 119532
Сайфитдинова Алсу Фаритовна — д. б. н., заместитель заведующего лабораторией; доцент кафедры анатомии и физиологии человека и животных
191186, г. Санкт-Петербург, набережная Мойки, д. 48
53/1 Komendantskiy Prosp., St. Petersburg, 97350
48 Naberezhnaya Moyki, St. Petersburg, 191186
Павлова Ольга Андреевна — к. б. н., биолог лаборатории; специалист лаборатории
192289, г. Санкт-Петербург, ул. Бухарестская, д. 152/1
53/1 Komendantskiy Prosp., St. Petersburg, 97350
152/1 Bukharestskaya Str., St. Petersburg, 192289
Леонтьева Ольга Анатольевна — эмбриолог лаборатории
197350, г. Санкт-Петербург, Комендантский пр-т, д. 53/1
53/1 Komendantskiy Prosp., St. Petersburg, 97350
Панина Алиса Николаевна — эмбриолог лаборатории
197350, г. Санкт-Петербург, Комендантский пр-т, д. 53/1
53/1 Komendantskiy Prosp., St. Petersburg, 97350
Бичевая Наталья Константиновна — к. б. н., заведующая лабораторией
197350, г. Санкт-Петербург, Комендантский пр-т, д. 53/1
53/1 Komendantskiy Prosp., St. Petersburg, 97350
Борозняк Иван Владимирович — заместитель генерального директора по развитию
119532, г. Москва, Ленинский пр-т, д. 111, кор. 1
11/1 Leninskiy Prospect, Moscow, 119532
Цель исследования: выполнить исследование клеток трофэктодермы (ТЭ) из разных областей эмбриона методом высокопроизводительного полногеномного секвенирования (Next Generation Sequencing, NGS) на платформе Illumina и сравнить данные для выявления степени дискордантности разных образцов одного эмбриона.Дизайн: сравнительное исследование.Материалы и методы. Для исследования использованы эмбрионы человека на ранних этапах развития, полученные в результате искусственного оплодотворения гамет здоровых доноров с нормальным кариотипом в рамках программы экстракорпорального оплодотворения. Для исследования были выбраны 14 эмбрионов человека, полученных в результате оплодотворения ооцитов от 10 доноров в возрасте от 20 до 32 лет донорской спермой 9 доноров из банка спермы ООО «МЦРМ». Два эмбриона деградировали в процессе разморозки. У 12 эмбрионов выполнена повторная биопсия клеток ТЭ в двух независимых участках: одна биопсия ТЭ, прилежащей к клеткам внутренней клеточной массы (ВКМ), и вторая биопсия ТЭ с противоположного от эмбриобласта полюса бластоцисты.Результаты. Cравнительное исследование молекулярного кариотипа клеток ТЭ, полученных из разных участков бластоцисты 12 эмбрионов, 36 образцов (по 3 от каждого), показало частичное расхождение только в одном наблюдении. При первичном исследовании у эмбриона молекулярный кариотип был представлен трисомией хромосомы 16: Seq(16)x3,(XY)x1. При вторичном выявлена дополнительно делеция в виде мозаицизма участка хромосомы 7 в клетках, прилежащих к ВКМ эмбриона: Seq(16)x3,(7q21.3 -> 7q36.3)x[0.5]). Все остальные результаты показали полную конкордантность вне зависимости от исследуемого участка ТЭ, а также лаборатории, в которой выполнено секвенирование.Заключение. Можно сделать вывод, что преимплантационное генетическое тестирование на анеуплоидии эмбрионов 5-го дня развития на основе методов высокопроизводительного полногеномного секвенирования на платформе Illumina позволяет получить надежные данные о хромосомных аномалиях и может быть успешно применено для выявления анеуплоидий у доимплантационных эмбрионов.
Study Objective: To study trophoblast (TB) cells taken from various sections of the embryo using Next Generation Sequencing (NGS) on Illumina platform, and to compare data in order to identify the degree of discordance between various samples from one embryo.Study Design: Comparative study.Materials and Methods. For the study, we used human embryos at early development stages, which originated from artificial insemination of germ cells taken from healthy donors with normal karyotype within the scope of the in vitro fertilisation program. We selected 14 human embryos originating from insemination of oocytes of 10 donors aged 20 to 32 years old with sperm taken from 9 donors from the semen bank of the International Centre for Reproductive Medicine. Two embryos underwent degradation during defrosting. For 12 embryos, we performed a repeated TB cells biopsy from two independent sections: one biopsy from TB adjacent to inner cell mass (ICM) cells and the other TB biopsy from blastocyte pole opposite to the embryoblast.Study Results. A comparison of molecular karyotype of TB cells taken from various sections of blastocyte in 12 embryos, 36 samples (3 sample for each embryo), demonstrated partial discordance only in one observation. In initial study, molecular karyotype of an embryo showed trisomy 16 syndrome: Seq(16)x3,(XY)x1. In the follow-up study, we found an additional deletion in the form of mosaicism in chromosome 7 section adjacent to ICM of the embryo: Seq(16)x3,(7q21.3 -> 7q36.3)x[0.5]). All other results demonstrated complete concordance irrespective of a TB section in question or a laboratory where sequencing was performed.Conclusion. It may be concluded that pre-implantation aneuploidy genetic testing of 5-day-old embryos using Next Generation Sequencing on Illumina platform allows obtaining reliable information on chromosomal abnormalities and can be successfully used to identify aneuploidy in pre-implantation embryos.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.